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關于內(nèi)毒素檢測,你需要知道的那些事!

點擊次數(shù):2844  更新時間:2020-08-28

  

 

什么是細菌內(nèi)毒素?

細菌內(nèi)毒素系指細菌的死體或細菌代謝物,細菌內(nèi)毒素的主要成分是產(chǎn)生革蘭素陰性菌細胞外壁層的脂多糖類物質,其活性主要源于其結構中的類脂A。細菌內(nèi)毒素廣泛存在于自然界中,各種細菌的內(nèi)毒素大致相同,可以引發(fā)熱,微循環(huán)障礙,內(nèi)毒素休克及播散性血管內(nèi)凝血等。因此,生物制品類,注射用藥劑,抗生素疫苗類等制劑以及醫(yī)療器材類必須經(jīng)過細菌內(nèi)毒素檢測試驗,合格后才能使用。

 

內(nèi)毒素的生物學活性 

內(nèi)毒素對機體可產(chǎn)生致病作用 ,它作為外源性 致 熱 原作 用 于 粒 細 胞 和 單 核 細 胞 等 ,使 之 釋 放 內(nèi)源性致熱原 ,引起發(fā)熱;它可激活血管活性物質的釋放 ,使末梢血管擴張,通透性增高 ,靜脈回流減少,心臟輸出量減低 ,導致低血壓并發(fā)生休克;因組織供血不足缺氧,導致代謝性酸中毒;同時,它可活化凝血因子Ⅻ ,導致彌漫性血管內(nèi)凝血 (dissemina— tedintravascularcoagulation,DIC);此 外 內(nèi)毒 素 還 可 引起 施 瓦 茲 曼 現(xiàn) 象 (Shwartzmanphenomenon)。另 一 方 面 它 又 可 發(fā) 揮 諸 多對機體有益的生物學活性 ,適 量的 內(nèi)毒素可增強機體 非特 異性免疫的作用,能夠抗感染 、抗輻射 ,并能夠增強 網(wǎng)狀 內(nèi)皮細 胞 的 活 力 ,并 具 有使 腫瘤 壞 死 消 退 的 活 性 。

 

內(nèi)毒素檢測技術的現(xiàn)狀

目前 較 為常 用 的 內(nèi) 毒 素 檢 測 方 法 多基 于 LAL 測 定 之 上 。鱟 是 一 種 海 洋 生 物 ,其 血 細 胞 內(nèi)含 有 對 內(nèi)毒 極 其 敏 感 的凝 血 系 統(tǒng) ,鱟試 驗 是 根 據(jù) 鱟 血 提 取 液 能被 皮 克 (pg)水平 的 內(nèi) 毒 素 凝 膠 化 的原理 ,通過檢測凝膠的形成來檢測 內(nèi)毒 素。我國藥典 規(guī)定 的 細 菌 內(nèi)毒 素 定 量 測 定 法 為 濁 度 法 (TurbidimetricTechnique) 和 顯 色 法,除 此 之 外 內(nèi)毒 素 檢 測 還 有 凝 膠 法 。

 

                                                     1 凝 膠 法   

本方 法主 要是待 檢 樣 品和 鱟試劑 各 0.1ml混 合 。37℃ 、6O分 鐘 反 應 后 ,18Omin倒轉 ,根 據(jù) 凝 膠 形 成 的情 況 判 定 的一種半定 量法。此法操作 比較簡單 、經(jīng)濟 ,而且 不 需要 儀 器 。0.03-EU/ml的 范 圍 內(nèi)進 行 半定 量 測 定 。

 

                                                              2 濁 度 法   

根 據(jù) 內(nèi) 毒 素 與 鱟試 劑 的 C 因 子 發(fā) 生 反 應 ,由 內(nèi) 毒 素 引 發(fā) 激 活 的 凝 固 酶 ,切 斷 凝 固 蛋 白原 中 的精 氨 酸 肽 鏈 ,形 成凝 固蛋 白從而產(chǎn) 生凝膠過 程 中的濁度變化 ,是用濁度儀定 量 的 方 法 ,此 法操 作 比 較 簡 單 、經(jīng) 濟 ,靈敏 度 較 高 ,檢 測 范 圍 較 大 (0.006—300EU/m1)。根 據(jù) 測 定 原 理 的 不 同 又 可 分 為 終 點 法 (EndopointTurbidimetricMethod)和 動 態(tài) 法 (KineticTurbidi metricMethod)。終 點 濁 度 法 是 根 據(jù) 到 達 規(guī) 定 時 間 點 上 反 應 液 的 終 濁 度 值 與 細 菌 內(nèi)毒 素 濃 度 成 比 例 的 關 系 的 一 種 檢 測 方 法 。動 態(tài) 濁 度 法 是 根 據(jù) 測 定 到 達 事 先 設 定 的 反 應 液 的 濁度 變 化 所 需 要 的 時 間 的對 數(shù) 值 與 細 菌 內(nèi)毒 素 濃 度 的 對 數(shù) 值 成 反 比例 關 系 的 一種 分 析 方 法 。本 方 法 因 有 配 套 儀 器 而 較 為 廣 泛 地 應 用 于 藥物 檢 測 及 臨 床 。

 

                                                             3 比 色 法  

根 據(jù) 被 測 內(nèi)毒 素激 活 的 凝 固酶 水 解 外 加 鱟 三 肽 (如 :B0C—IEU—GIY—ARG-PNA 等 )中 的 精 氨 酸 肽 鏈 ,釋 放 出 黃 色 的對 硝 基 苯 胺 (PNA),用 冰 醋 酸 終 止 反 應 進 行 吸 光 度 測 定 ,或 用 游 離 的 PNA 和 偶 氮 試 劑 反 應 , 終 形 成 紅 色 的 偶 氯 藍 復 合 物 而進 行檢 測 的 一 種 方 法 。它 也 分 為終 點 法 和 動 力 學 法 。此 法 操 作 較 復 雜 ,但 靈 敏 度 和 精 密 度 都 較 高 ,目前 也 較 為 常 用 。
   

                                                     4 酶 聯(lián) 免疫 吸 附 測 定 法 

主 要是 利 用 內(nèi) 毒 素 作 為外 源 性 致 熱 原 的 生 物 學 活 性 ,通 過 對 內(nèi)毒 素刺 激 巨噬 細 胞 后 產(chǎn) 生 的 內(nèi)源 性 致 熱 原 (如 TNF,IL一1等 )進 行 檢 測 ,從 而 對 內(nèi)毒 素進 行定 量檢 測 。
 

                                                  5 流 式 細 胞 術(flow cytometry)

是 應 用 針 對 內(nèi) 毒 素 表 面抗 原 決 定 簇 的 單 克 隆抗 體 (如 抗 LPS單 克 隆 抗 體 )對 內(nèi)毒 素 進 行 熒 光 標 定 而 后 應 用 流 式 細 胞 儀 進 行 檢 測 的 一 種 方 法 。本 方 法 不 同于 其 它 方 法 之 處 在 于 它 所 測 定 的 是 內(nèi) 毒 素 的 量 而 不 是 活 性 。

   

                                                   6 化學發(fā)光測定法

應用 CR1 和 CR3受 體 誘 導 中性 粒 細 胞 的 氧 化 反 應 作 為 一 個 反 應 平 臺 , 通過 測定 內(nèi)毒素對 中性 粒細胞 的 生物學作 用來 檢測 內(nèi)毒素 的水平 。

 

 

內(nèi)毒素檢測產(chǎn)品信息

品牌             

產(chǎn)品名稱

     描述

包裝

安度斯

鱟試劑

0.03EU/mL凝膠法鱟試劑

0.1mL/

安度斯

細菌內(nèi)毒素工作標準品

10EU/支 細菌內(nèi)毒素工作標準品(安度斯制備)

10/

安度斯

內(nèi)毒素檢查用水

5mL/支 內(nèi)毒素檢查用水

10/

 

訂購信息

品牌                            貨號                                   

LONZA                        N289-06                

LONZA                        N289-125

LONZA                        N289-25

LONZA                        N594-03

LONZA              N594-06

LONZA                       N594-125

 

 

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