PeproTech細胞因子常見問題解答

 PeproTech研制出的無動物成分的重組蛋白(animal-free recombinant proteins)，是利用專有的無動物成分生產(chǎn)設(shè)施，在嚴格的無動物成分條件下生產(chǎn)出來，因此痕量的動物源性污染引發(fā)潛在問題的可能性被降至低，從而*達到臨床前研究和細胞治療用標準。PeproTech研發(fā)無動物成分的培養(yǎng)基添加物試劑盒(animal-free Media Supplement Kits)。這些試劑盒經(jīng)改良設(shè)計，其中的無血清組分對多種哺乳動物細胞的生長有更好的維持能力。

優(yōu)質(zhì)的RUO細胞因子

        全長和*生物活性的RUO細胞因子是由我們經(jīng)驗豐富的蛋白質(zhì)科學家內(nèi)部開發(fā)的。該過程從我們的分子生物學實驗室開始，進行基因設(shè)計和表達，然后到細胞銀行，進行發(fā)酵/細胞培養(yǎng)，純化，終進行QC測試。

大腸桿菌（E.coli）表達蛋白：

PeproTech擁有超過15,000平方英尺的發(fā)酵，蛋白質(zhì)加工和凈化設(shè)備，能夠滿足客戶的需求。

細胞培養(yǎng)表達蛋白：

PeproTech擁有先進的細胞培養(yǎng)和蛋白質(zhì)純化設(shè)備，能夠提供糖基化的*生物活性蛋白。

常見問題 - RUO細胞因子

每個產(chǎn)品的相關(guān)信息均在該產(chǎn)品隨附的CoA(說明書)中，請仔細閱讀這些信息，以獲知溶解和存儲的方法。

1. 你們的蛋白產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何？ 

除非在產(chǎn)品說明書中特別注明，我們的所有產(chǎn)品均為凍干粉，在室溫條件下非常穩(wěn)定。盡管如此，我們還是建議您將凍干產(chǎn)品保存在-20oC至-80oC。對于大多數(shù)產(chǎn)品，重懸后在4oC僅能短期保存。如想長期保存，請用含載體蛋白(如0.1% BSA)的溶液稀釋已重懸的蛋白，然后分裝、凍存于-20oC至-80oC。分裝濃度要求不低于1 µg/ml，每管體積要求不小于10µl。務(wù)必注意，請避免反復(fù)凍融，因每次凍融均可能引起蛋白的部分變性。因此，我們建議分裝的蛋白溶液凍融不要超過1次。

2. PeproTech重組蛋白的內(nèi)毒素水平如何？

PeproTech大部分無動物成分級別蛋白的內(nèi)毒素水平均保證低于0.01 ng/µg蛋白，即0.1 EU/µg蛋白。對于大多數(shù)非無動物成分級別的蛋白，內(nèi)毒素水平保證低于0.1 ng/µg蛋白，即1 EU/µg。其實，許多蛋白的實際內(nèi)毒素含量均低于上面標稱的內(nèi)毒素水平，具體信息請與我們的質(zhì)量保證(QA)部門聯(lián)系。

3. 為什么我在管中看不到蛋白團塊？

與市場上的許多蛋白產(chǎn)品不同，PeproTech的產(chǎn)品中不含任何載體蛋白和其它添加物 (如BSA, HSA和蔗糖等)，并且常在含鹽量的溶液中凍干，結(jié)果是微量的蛋白在凍干過程中會沉積在管壁上，形成蛋白薄膜，有時肉眼觀察不到。我們建議，在打開管蓋前用小離心機快速離心20-30秒，使附著在管蓋或管壁上的蛋白團塊聚集于管底。盡管可能看不到蛋白團塊，但我們的質(zhì)控程序保證每管中的蛋白含量準確無誤。

4. 哪些細胞因子有種屬交叉活性？

除少數(shù)例外，大多數(shù)人細胞因子對小鼠細胞均有活性，很多小鼠細胞因子也可作用于人，但反應(yīng)的特異性可能低于對應(yīng)的人細胞因子。IL-7等為數(shù)不多的人細胞因子作用于小鼠細胞時，甚至比對應(yīng)的小鼠細胞因子活性還強。干擾素，GM-CSF, IL-3和IL-4等細胞因子的種屬特異性很強，與其它種屬細胞的交叉反應(yīng)活性非常弱。相反，成纖維細胞生長因子(FGF)和神經(jīng)營養(yǎng)素(neurotrophins)等高度保守，在不同動物種屬細胞上均呈現(xiàn)良好的生物學活性。

5. ED50和units/mg均用來表示比活性(specific activity)，兩者之間有什么關(guān)聯(lián)？

ED50的定義是可誘導50%大反應(yīng)的細胞因子濃度，而比活性(specific activity)是單位重量蛋白樣品中所含的活性單位。比活性單位(Specific Activity Units)只能用于表示蛋白的效能，且僅適用于劑量反應(yīng)曲線為S形的蛋白。

6. 比活性單位(specific activity units)和活性的單位(International Units)之間有什么關(guān)聯(lián)？比活性單位和單位(IU)之間沒有直接的關(guān)聯(lián)，不能相互換算。

單位(IU)是與標準品的活性單位(即IU/ng)比對后得出的活性數(shù)值，后者是在世界衛(wèi)生組織(WHO)領(lǐng)導的合作研究中確定的。WHO標準品由英國國家生物制品檢定所(NIBSC)制備和提供。

簡單地與標準品比對而得出的蛋白活性單位(IU)常會出現(xiàn)偏差，原因是每個蛋白廠家所用的活性檢測方法很難一致，從而導致與標準品比對后得到的單位(IU)值相互間不具可比性。想要實現(xiàn)真正的可比性，必須建立標準的活性檢測方法，以保證所得出的蛋白活性單位(IU)值僅與蛋白的質(zhì)量有關(guān)，而與蛋白的來源無關(guān)。

7. PeproTech是怎樣得到蛋白活性的單位(IU)值的？

在可能的情況下，PeproTech通過將自己的產(chǎn)品與對應(yīng)的WHO標準品在自已的生物活性測試中進行多次平行比對來得出單位(IU)值。多次對比可保證我們能夠排除因測試本身的不穩(wěn)定性(如產(chǎn)品批次，使用方法和測試方案等的變異性)而導致的異常值的出現(xiàn)。經(jīng)多次比對得出的結(jié)果可對我們產(chǎn)品的單位(IU)值進行可靠的定量。